Пцр у детей что показывает
ПЦР-диагностика
Полимеразно-цепная реакция (ПЦР) – это одно из самых ярких достижений в сфере молекулярной биологии. Метод получил широчайшее распространение в разных областях науки. Благодаря очень высокой специфичности и чувствительности, метод ПЦР применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека.
Для анализа методом ПЦР можно использовать любые биологические материалы, которые содержат нуклеиновые кислоты (молекулу ДНК или РНК).
Принцип ПЦР- исследования
Кому мы обязаны появлением метода ПЦР?
Со слов американского биохимика Керри Мюллиса (Kary Mullis), идея идентифицировать живые организмы по короткому участку их генетического кода (ДНК) пришла ему в голову в 1983 году, по пути с работы домой. А в основе этой идеи, лежала работа другого американского биохимика, Артура Корнберга (Arthur Kornberg), которая в свое время не нашла отклика у научного сообщества.
Керри допустил возможность того, чтобы взять молекулу ДНК какого-либо организма, с помощью высокой температуры «распустить» ее спираль на две нити, специфическими маркерами-праймеры пометить уникальные для этого микроорганизма участки ДНК и затем, применив фермент ДНК-полимеразу, создать из двух нитей две новые молекулы ДНК. Но уже содержащие в себе меченные праймеры. И потом останется просто искать эти участки в диагностическом материале.
В итоге, корпорация CETUS, в которой работал Мюлис, выделила ему команду ученых. И в 1985 году, в издании Американского общества генетики человека, появилась публикация с теоретическим обоснованием ПЦР, как метода идентификации генетического материала живых организмов.
Как это все происходит в лаборатории
Выделение ДНК
Элонгация
Или синтез. После завершения процесса отжига, в реакционной смеси создают условия для активности полимеразы. Фермент, ориентируясь на молекулы праймеров (а не исходных нуклеиновых кислот), начинает синтез новых ниток ДНК/РНК. Которые становятся копиями исходных, искомых молекул нуклеиновых кислот.
Такой температурный цикл проводится 30 и более раз. В результате, даже при изначально небольшом количестве искомого генетического материала, в реакционной смеси накапливается значительное число «помеченных» праймерами нуклеиновых кислот (растет экспоненциально, с удвоением при каждом цикле).Обнаружить большие количества ДНК/РНК намного проще, за счет чего реализуется еще одно преимущество ПЦР – высочайшая чувствительность.
Детекция
Оценка результатов ПЦР проводится несколькими путями:
Преимущества методики ПЦР
Всего разработано более 10 разных методик амплификации, применяемых лабораториями в зависимости от исходных условий и поставленных целей.
Общим для них есть высокая чувствительность (для положительного результата достаточно 40 (!) или менее искомых копий ДНК в 1 мл образца, то есть вероятность ложноотрицательного ответа ничтожно мала. И очень высокая специфичность: вероятность ложноположительного ответа составляет менее 1%.
Но точность результатов сильно зависит от качества сбора диагностического материала, тщательного соблюдения всех технических требований к каждому этапу и качеству оборудования, расходных материалов (буфера, праймеров, раствора для отмывки и т.д.).
Области применения в медицине
В дерматовенерологии ПЦР используют для выявления венерических заболеваний: микоплазменной, хламидийной инфекций, сифилиса, генитального герпеса и др.
Инфекционисты активно используют ПЦР для диагностики туберкулеза, ВИЧ, вирусных гепатитов, герпеса, мононуклеоза, вируса Эпштейн-Барр и др.). А с помощью ПЦР в реальном времени, оценивая вирусную нагрузку, врачи могут составить мнение о динамике заболевания, отклике на лечение, что особенно актуально для пациентов с ВИЧ, принимающих терапию.
Также благодаря ПЦР врачи могут в течение нескольких дней с уверенностью идентифицировать коклюш и паракоклюш, выявить возбудителей эпидемии ОРВИ. Уточняются типы вируса гриппа, циркулирующие на определенной территории, на основании чего появляется возможность разработать эффективную вакцину для каждого сезона гриппа.
В течение суток или быстрее можно установить вид возбудителя кишечной инфекции, а значит – назначить адекватное лечение и обнаружить вероятный источник заражения.
Летом, ПЦР актуальна для диагностики заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами: боррелиоза (болезни Лайма), клещевых энцефалитов.
Метод позволяет работать с любым биологическим материалом. Гемотрансмиссивные инфекции (сифилис, ВИЧ, гепатиты, боррелиоз) исследуются по пробе венозной крови или спинномозговой жидкости. Кожные болезни (герпес, грибки) – по соскобу с пораженного участка. Венерические и урологические – по образцу мочи, спермы, влагалищного отделяемого.
Так что в медицине, ПЦР применяется везде, где нужна высокая точность и быстрота получения результатов.
Лабораторные исследования, выполняющиеся методом ПЦР:
Родителям невозможно самостоятельно определить, чем болеет их чадо
Дети всё чаще стали попадать в больницы
Фото: Никита Телиженко / 45.RU
Заведующая инфекционным отделением Филатовской детской больницы Елена Дондурей объяснила «Доктору Питеру», в каком случае нужна госпитализация и насколько часто развивается пневмония у школьников и малышей.
Половина детей переносит новую коронавирусную инфекцию бессимптомно. Эти цифры привел министр здравоохранения Михаил Мурашко во время визита во Владимирскую область. Примерно 13% из тех, кто болеет с симптомами, находятся в тяжелом состоянии. Статистика приведена по стране, однако от региона к региону картина меняется, где-то — довольно заметно.
— Пока существенных изменений в тяжести течения новой коронавирусной инфекции у детей, по сравнению с первыми тремя волнами, мы не видим, — рассказала «Доктору Питеру» детский инфекционист Елена Дондурей. — На долю детей с у нас приходится среди пациентов с инфекционной патологией в стационаре.
Елена Дондурей — главный внештатный детский инфекционист Петербурга, заведующая инфекционным боксированным отделением №10 Филатовской больницы, кандидат медицинских наук.
Правда, без тестирования даже опытный врач не всегда сможет отличить привычный нам ОРВИ от новой коронавирусной инфекции.
— У детей с новой коронавирусной инфекцией, как и раньше, ведущим вариантом течения является ОРВИ, — объяснила Елена Дондурей. — При этом родители никак самостоятельно не поймут, что это Этиологический диагноз невозможно поставить даже врачу без лабораторного обследования. Можно только заподозрить ковид, когда у пациента с респираторной симптоматикой был доказанный контакт с больным новой коронавирусной инфекцией.
То есть, если у ребенка нет, например, сильного кашля, или же потери вкуса, это вовсе не означает, что он не заразился ковидом. Любые симптомы — повышение температуры, насморк, боль в горле, кашель, чихание — должны вызывать подозрения. В такой ситуации уже точно не будет лишним. Вероятно, дальше привычных дело не зайдет, однако точный диагноз необходим в том числе для того, чтобы остановить распространение вируса.
— У детей с новой коронавирусной инфекцией, как и раньше, ведущим вариантом течения является ОРВИ, поражение легких у стационарных пациентов развивается в среднем в 16% случаев, — уточнила Елена Дондурей. — Особенность детского ковида — в сочетанном течении респираторных вирусных инфекции, однако вирусно-бактериальное поражение легких дает хороший эффект на антибактериальную терапию.
Часто врачи после осмотра и положительного результата рекомендуют продолжать лечение дома.
— Решение о необходимости госпитализации или амбулаторном лечении принимает только врач в зависимости от наличия или отсутствия показаний, — говорит главный детский инфекционист Петербурга. — Надо сказать, что нам удалось существенно сократить сроки госпитализации за счет более ранней выписки на долечивание в амбулаторных условиях.
Но можно сказать, что в истории с «детским» коронавирусом Петербургу повезло больше, чем другим регионам. Министр здравоохранения Пензенской области заявил, что детский стационар региона на 200 коек заполнен полностью. И рассказал, что до пандемии в их больнице лежало максимум 40 детей. 23% всех госпитализированных в Якутии — это дети. Есть регионы, где сообщают о тяжелом течении вируса у детей, их подключили к ИВЛ. Больше всего растет заболеваемость и степень тяжести у подростков от 12 до 18 лет.
— Когда начались летние каникулы, заболеваемость снизилась, — напомнил молекулярный биолог Денис Лагуткин ютьюб-шоу «Больше всех надо». — С началом учебного года в этой возрастной группе мы отметили резкий рост госпитализаций. Дети и раньше болели коронавирусом, просто это, как правило, не приводило к серьезным последствиям. Сейчас же, с новым штаммом «дельта», мы видим утяжеление. Возможно, вирус стал более патогенным.
В России вопрос о вакцинировании детей близок к решению
О рекомендациях как подготовиться к сдаче ПЦР-теста на COVID-19
В условиях сохранения рисков распространения новой коронавирусной инфекции Роспотребнадзор напоминает, что при сдаче ПЦР-теста необходимо соблюдать определенные рекомендации.
Что будет, если есть или пить перед сдачей мазков для теста ПЦР?
По инструкции к наборам для ПЦР-исследования на SARS-CoV-2 взятие мазков рекомендуется проводить не раньше 3-4 часов после последнего приёма пищи. Почему это важно?
Коронавирус SARS-Cov-2 живет внутри эпителиальных клеток. Для ПЦР-исследования важно получить мазок с достаточным количеством инфицированных клеток. В момент проглатывания еды эпителиальные клетки механически слущиваются пищевым комком с поверхности слизистой оболочки. Если взять мазок сразу после еды, в пробирку может попасть недостаточное количество инфицированных клеток. В этом случае, пациент может получить ложноотрицательный результат анализа. То же самое касается питья. Вода смывает с поверхности миндалин, задней стенки глотки инфицированные клетки.
Можно ли пользоваться лекарственными средствами в нос и горло (капли, спреи, антисептики) перед сдачей мазков?
Перед взятием мазков ни в коем случае нельзя использовать лекарственные средства для местного применения (капли, спреи и др). После их применения количество вируса на слизистой снижается и увеличивается вероятность получения ложноотрицательных результатов ПЦР-теста.
Можно ли употреблять алкоголь перед сдачей теста ПЦР и как это повлияет на результат?
Алкоголь содержит этиловый спирт (этанол), который также входит в состав многих антисептических средств. По рекомендациям Роспотребнадзора, для эффективного антисептического действия в составе дезинфицирующего средства должно быть не менее 60-80% этилового спирта. Хотя в состав спиртных напитков (обычно) входит меньше этанола, чем необходимо для дезинфекции, но после приема алкоголя вероятность выявления коронавируса в мазке также может снизиться.
Почему нельзя чистить зубы перед сдачей теста ПЦР?
Основная цель на этапе взятия мазков для ПЦР-исследования – получить биологический материал с достаточным количеством клеток, пораженных коронавирусом. Применение любых очищающих средств для полости рта снижает количество вируса в получаемом мазке. Зубная паста может содержать антисептические компоненты. Попадание ее остатков в пробирку с мазком может мешать проведению анализа. Кроме того, чистка зубов требует еще и дополнительного полоскания рта, что также не рекомендовано перед забором биоматериала.
Применение косметики (помады, блески и бальзамы для губ) может повлиять на результат теста?
Материал для исследования берут не из полости рта, а из зева и носоглотки. Если соблюдать все правила взятия мазка и не прикасаться зондом к губам, то наличие декоративной косметики не должно помешать получению адекватного материала для ПЦР-теста. Но при случайном попадании в пробу косметические средства могут замедлить ПЦР-реакцию. Поэтому лучше декоративную косметику нанести уже после того, как мазок был взят.
Откуда все-таки берут мазок – из зева или носоглотки?
И из зева, и из носоглотки. Входными воротами для вируса SARS-CoV-2 являются верхние дыхательные пути. После попадания на слизистые носо- и ротоглотки (зева) вирус начинает размножаться в эпителиальных клетках. Поэтому в конце инкубационного периода и в первые дни клинических проявлений наиболее информативными являются мазки именно из этих областей. Для исследования мазок берут с поверхности миндалин, небных дужек и задней стенки ротоглотки. При взятии мазка из носоглотки зонд вводят по наружной стенке носового хода на достаточную глубину. Мазок, взятый со слизистой преддверия носа, может не выявить РНК коронавируса SARS-CoV-2.
Минимум за 3 часа до взятия мазков из ротоглотки (зева) нельзя: принимать пищу, пить, чистить зубы, полоскать рот/горло, использовать спрей-освежитель для ротовой полости, жевать жевательную резинку, курить.
Минимум за 3 часа до взятия мазков из носоглотки нельзя: промывать нос, использовать спреи, капли, мази для носа.
За два дня до взятия мазка рекомендуется отказаться от употребления спиртных напитков.
Сдача мазка на ковид позволяет получить точный результат, даже если микрочастиц возбудителя содержатся мало, и отсутствуют клинические симптомы. ПЦР помогает ответить на главный вопрос: имеется ли заражение. Выяснить, когда контактировал организм человека с вирусом, а также стадию заболевания не представляется возможным. Для этого используются другие лабораторные методы.
В крупных населенных пунктах диагностические центры проводят единовременное тестирование сотрудников предприятий, организаций с целью выявления источника инфекции и определения последующих действий, например наложение карантина, проведение лечения. Медицинские работники самостоятельно выезжают и на месте проводят взятие мазков.
Мазок на коронавирус SARS-CoV-2 берется дважды. Первый раз – на первый день, а второй – на 3 день при условии, что клинические симптомы не проявляются. Если приходится постоянно контактировать с ковидными больными (например, медицинским работникам), то ПЦР-диагностика проводится раз в неделю.
